眼刺激試驗是化妝品安全評價的主要測試項目，化妝品引起的局部眼刺激通常包括結膜、角 膜、虹膜和淚腺的作用， 基于體內眼刺激作用發生的機制，目前已開發了多種替代方法。因此，廣曼根據角膜損傷的發生機制，結合體外方法的原理和標準化應用程度，根據客戶不同需求，為客戶提供最專業的眼刺激試驗方案。
一．雞胚絨毛膜尿囊膜實驗(HET-CAM)
1.實驗目的
測試受試物引起雞胚絨毛尿囊膜毒性變化的能力，從而客觀評估物質潛在的眼刺激性程度。
2.實驗原理
雞胚絨毛尿囊膜試驗是一種較早被采用的眼刺激性體外評估方法，是利用雞胚絨毛膜尿囊膜結構與人結膜相似的特點開發的替代方法。絨毛尿囊膜（CAM）是一個呼吸性膜，包圍在雞胚周圍。本試驗利用孵化的雞胚中期絨毛尿囊膜血管系統完整、清晰和透明的特點，將受試物直接接觸CAM膜，于5 min之后觀察絨毛尿囊膜毒性效應指標（主要為：出血、凝血 和血管融解）的變化，這些指標反映血管及血管網的形態結構、顏色和通透性的變化，以及反映絨毛尿囊膜蛋白質變性等現象及其受損程度，然后組合得到一個評分，用于評估受試物的眼刺激性。
3.評分標準
表 8-4 HET-CAM 評分表
| 分值 |
0分 |
1分 |
2分 |
3分 |
| 出血 |
無出血 |
輕度出血：僅見細小血管出血和少量出血（如0.5% TexaponASV，作用5min） |
中度出血：小血管和大血管出血，并有明顯的血液流出（如1.0% TexaponASV，作用5min） |
重度出血：幾乎所有血管都出血，大量血液流出（如5% TexaponASV，作用5min） |
| 凝血 |
無凝血 |
輕度凝血：血管內 和/或 血管外輕度凝血，和/或 CAM膜輕度混濁（輕度凝血如0.2% NaOH 溶液作用 5min，輕度混濁如0.3% 乙酸作用5min） |
中度凝血：血管內 和/或 血管外中度凝血，和/或 CAM膜中度混濁（中度凝血如0.3% NaOH 溶液作用5min，中度混濁如3% 乙酸作用5min） |
重度凝血：血管內 和/或 血管外重度凝血，和/或 CAM膜重度混濁（重度凝血如0.5% NaOH 溶液作用5min，重度混濁如30% 乙酸作用5min） |
| 血管融解 |
無血管融解 |
輕度血管融解：僅小血管融解（如0.5% TexaponASV，作用5min） |
中度血管融解：小血管和大血管融解（如 1% TexaponASV，作用5min） |
重度血管融解：大血管和全部血束都融解（如 5% TexaponASV，作用5min） |
4.評分附圖
5.刺激性評價
表1. 刺激評分結果評價
| 刺激評分IS |
預測分類 Prediction classification |
| IS＜1 |
無刺激性 Non-irritant（NI） |
| 1≤IS＜5 |
輕度無刺激性Slightly irritant（SI） |
| 5≤IS＜9 |
中度無刺激性 Moderately irritant（MI） |
| IS≥10 |
強刺激性/腐蝕性 Strong irritant/Corrosive（Co） |
終點評分法（ES）：每只雞胚記分=每只雞胚觀察到的出血、凝血和血管融解程度的和；
終點評分（ES）=6 只雞胚得分的數總和。
表2.終點評分法結果評價
| 刺激性分類 |
無/輕刺激性 |
中度刺激性 |
強度刺激/腐蝕性 |
| 終點評分 |
ES≤12 |
12＜ES＜16 |
ES≥16 |
二：絨毛膜尿囊膜血管試驗(chorioallantoic membrane vascular assay．CAMVA)
是簡化了的 HET-CAM方法，只觀察受試物暴露CAM 30 min后血管的變化(出血、血管溶解和凝血)，計算使50％ 的雞胚出現上述損傷的受試物濃度。CAMVA法適 用于輕度到中度眼刺激性化合物的檢測，也可正確區分刺激物和非刺激物。
