一、實驗目的
模擬化妝品生產、儲存和消費者使用過程中可能存在的微生物污染（一次污染和二次污染），人為的在產品中加入定量的已知菌種，定期跟蹤檢測產品中微生物的消長情況，來評判防腐劑的防腐效果的實驗，從而最大程度保證化妝品中中微生物含量達標。
《化妝品安全技術規范》2015 版的微生物指標
| 微生物指標 |
限值 |
備注 |
| 菌落總數（CFU/g 或 CFU/mL） |
≤500 |
眼部化妝品、口唇化妝品和兒童化妝品 |
| ≤1000 |
其他化妝品 |
| 霉菌和酵母菌總數（CFU/g 或 CFU/mL） |
≤100 |
- |
| 耐熱大腸桿菌/g（或 mL） |
不得檢出 |
- |
| 金黃色葡萄球菌/g（或 mL） |
不得檢出 |
- |
| 銅綠假單胞菌/g（或 mL） |
不得檢出 |
- |
二、菌種選擇
同微生物限度實驗。
三、實驗方法
-
方法1一次加菌法
稱取一定量的受試樣品，按1:x的比例加入混合菌懸液，要求樣品中的細菌初始加菌濃度達到105*106 cfu/g；酵母和霉菌初始加菌濃度達到105*106 cfu/g以及不同濃度梯度抑菌劑。將樣品與菌液充分混合均勻，用封口膠封好樣品瓶口，置于25℃的培養箱中保存。在接菌后的第7、14、21和28天取樣檢測微生物含量。
-
方法2 三次加菌法
稱取一定量的受試樣品，按1：x的比例加入混合菌懸液，要求樣品中的細菌初始加菌濃度達到106*107 cfu/g ；酵母和霉菌初始加菌濃度達到105*106 cfu/g 。將樣品與菌液充分混合均勻后，用封口膠封好樣品瓶口，置于25℃的培養箱中培養。接下來每14天加菌一次一共加3次菌，每次加菌濃度均需達到要求。從第一次加菌后的每七天取樣做微生物含量檢測，即采樣分析第7、14、21、28、35、42天中樣品的含菌量。其中，第14天檢測后進行第二次加菌，第28天檢測后進行第三次加菌。
四、評價標準
CTFA標準
美國化妝品、洗滌劑和香精協會（CTFA)推薦的菌種，是極具代表性的，按CTFA標準做微生物挑戰試驗通過，全世界公認3年保質期。
| 第一次加菌 |
細菌 |
細菌：7天內細菌的數量降低99.9%以上，14天內細菌的數量< 10，28天時未檢出。 |
| 霉菌和酵母菌 |
霉菌和酵母菌總數培養7天時數量減少90%，不再增加，通過測試。 |
| 第三次加菌 |
防腐效果優良 |
即三次加菌后，在每次加菌后的第14天時，存活菌量減少99.9%，通過測試。 |
| 防腐效果尚可 |
即三次加菌后，在每次加菌后的第14天時，存活菌量減少90%以上，通過測試。 |
| 防腐效果差 |
即三次加菌后，在每次加菌后的第14天時，存活菌量減少低于起始濃度的90%,不通過測試。 |
五、參考標準
到目前為止, 世界各國及其有關組織對化妝品防腐體系的評價還未有一個統一的方法, 但其基本設計則是相同的,其中美國藥典( USP)法及美國化妝品、香精和洗滌劑協會( CTFA) 法是較具代表性的兩種方法。
我司參考標準：
美國藥典USP 39（51）
美國化妝品、香精和洗滌劑協會( CTFA)
歐標EP 7.0-5.1.3
